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高純度質(zhì)粒大量快速提取試劑盒

簡(jiǎn)要描述:

高純度質(zhì)粒大量快速提取試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:豬肝星狀細(xì)胞(永生化) 環(huán)指蛋白128封閉多肽 放線共生放線桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)試劑盒 ELISA Ca++Mg++ ——ATP酶酶活性比色法檢測(cè)試劑盒 德巴利腐霉 大腦發(fā)育同源蛋白2抗體

更新時(shí)間:2024-01-12

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高純度質(zhì)粒大量快速提取試劑盒

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

貨號(hào)

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

A-Hc2019

高純度質(zhì)粒大量快速提取試劑盒

10 次

保存條件:收到本產(chǎn)品后按照上面指示溫度存放各成分,儲(chǔ)存18個(gè)月不影響使用效果。

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒采用改進(jìn)SDS-堿裂解法裂解細(xì)胞,離心吸附柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜在高鹽、低pH值狀態(tài)下選擇性地結(jié)合溶液中的質(zhì)粒DNA,再通過(guò)去蛋白液和漂洗液將雜質(zhì)和其它細(xì)菌成分去除,最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈質(zhì)粒DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點(diǎn):

1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好??朔藝?guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2.不需要使用有毒的苯、氯仿等試劑,從100-200ml大腸桿菌LB培養(yǎng)液中,可快速提取0.2-0.5mg純凈的高拷貝質(zhì)粒DNA,提取率達(dá)80 %左右。

3.獲得的質(zhì)粒產(chǎn)量高、超螺旋比例高、純度好,可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、PCR、體外轉(zhuǎn)錄、測(cè)序等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

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PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備?

試劑:
模板DNAPCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物,分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為TA克隆等過(guò)程中使用到的引物;dNTPsPCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥(niǎo)苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過(guò)程,用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增;Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類(lèi)的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴(kuò)增DNA鏈;PCR buffer溶液:對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛,可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;酶切體系:PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟,常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn),用來(lái)判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;
設(shè)備:
PCR儀:用于控制反應(yīng)溫度,保證PCR反應(yīng)時(shí)不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制;電泳槽:用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動(dòng)提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn):

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由2035個(gè)循環(huán)組成,每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟:

一、變性:

利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個(gè)循環(huán)之前,通常加熱長(zhǎng)一些時(shí)間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時(shí)間1-2分鐘,接下來(lái)PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。

二、退火或稱(chēng)接合,復(fù)性:

DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯(cuò)誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合。該步驟時(shí)間1-2分鐘。

三、延伸:

DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開(kāi)始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴(lài)于DNA聚合酶。該步驟時(shí)間依賴(lài)于聚合酶以及需要合成的DNA片段長(zhǎng)度。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min、較新的Tbr(來(lái)自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化:

1、變性溫度和時(shí)間:

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜WC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再?gòu)?fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過(guò)高或高溫持續(xù)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),可對(duì)Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2、復(fù)性溫度和時(shí)間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過(guò)程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高,產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3、延伸溫度和時(shí)間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí),過(guò)高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時(shí)間,可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長(zhǎng)延伸時(shí)間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時(shí)間。這里需要注意,延伸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時(shí)間。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說(shuō)20?25次循環(huán)后,PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值,實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴(kuò)增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品:

沃氏葡萄球菌染料法熒光定量PCR試劑盒

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶ELISA試劑盒 PARP免費(fèi)代測(cè)試劑

甲型流感病毒M1亞型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒

當(dāng)歸染料法PCR鑒定試劑盒

表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體ELISA試劑盒 EGFR免費(fèi)代測(cè)試劑

丙型肝炎病毒5型PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

雙??虏《?/span>PCR檢測(cè)試劑盒

補(bǔ)體成分8γELISA試劑盒

奈瑟菌通用探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

弧菌型PCR檢測(cè)試劑盒

補(bǔ)體成分1q子成分AELISA試劑盒

木絲霉染料法熒光定量PCR試劑盒

鏈球菌A組染料法熒光定量PCR試劑盒

沉默調(diào)節(jié)蛋白7ELISA試劑盒

胎兒彎曲桿菌探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

犬皰疹病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

叢狀蛋白D1ELISA試劑盒

魚(yú)特定基因序列PCR檢測(cè)試劑盒

犬腺體病毒2型(犬傳染性喉氣管炎病毒)探針?lè)晒舛縋CR試劑盒

單酰甘油-O-?;D(zhuǎn)移酶2ELISA試劑盒

牛分枝桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒

鏈霉菌通用探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

蛋白SELISA試劑盒

馬蛔蟲(chóng)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

利什曼原蟲(chóng)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

蛋白酶激活受體1ELISA試劑盒

綿羊皰疹病毒1型PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

犬布氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒

毒蕈堿型受體M5ELISA試劑盒

納氏蟲(chóng)屬通用·PCR檢測(cè)試劑盒

柯薩奇病毒 A6 型核酸檢測(cè)試劑盒

人核糖核酸酶,核糖核酸酶A家族,(肝臟,嗜酸性粒細(xì)胞源性神經(jīng)毒素)(RNASE2)試劑盒ELISA

牛呼腸孤病毒PCR檢測(cè)試劑盒

禽副粘病毒通用探針?lè)晒舛?/span>RT-PCR試劑盒(暫停)

α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)ELISA試劑盒

雞痘病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

指環(huán)蟲(chóng)屬通用染料法熒光定量PCR試劑盒

高純度質(zhì)粒大量快速提取試劑盒人鈣蛋白酶抑制蛋白(CAST)檢測(cè)試劑盒elisa

島青霉PCR檢測(cè)試劑盒

錦鯉皰疹病毒PCR檢測(cè)試劑盒

NADPH氧化酶3(NOX3/MOX2)ELISA檢測(cè)試劑盒

犬流感病毒通用探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒

腺病毒PCR檢測(cè)試劑盒

人白介素5受體alpha(IL5RA)試劑盒ELISA

牛海綿狀腦病毒PCR檢測(cè)試劑盒

 


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